原核表达质粒载体构建服务

原核表达质粒载体构建服务

世联博研生命科学服务中心提供you质的原核表达质粒载体构建服务。大肠杆菌(E. coli)作为蛋白表达系统，具有两个显著特征：操作简单，可在廉价的培养基中高密度生长。它的这些特征使其在科研应用中成为高效表达异源蛋白常用的原核表达系统。

服务范围

1. 世联博研生命科学服务中心有自己的质粒载体库，以及Clontech、Invitrogen、Stratagen、Novagen、Promega、Amersham等公司的质粒载体。均为实验室常用质粒载体。

如有需要，请联系我们。

2. 世联博研生命科学服务中心为客户构建或you化改造te定的载体，将目的基因装载到te定的载体上，同时根据客户需要，对载体进行you化（包括启动子you化、筛选标记you化、其它调控元件you化、密码子you化以及表达you化筛选等），使得到的载体更适合蛋白表达与大肠杆菌内其他操作。

收费标准

服务周期

1. 30个工作日左右，具体视客户要求以及载体类型而定。

2. 如客户需表达重组蛋白，详情请查看蛋白质表达服务，服务周期根据其蛋白表达纯化的具体情况而定，请来电咨询。

客户须知（对材料的要求、注意事项）

1. 客户需提供目的基因的名称及基因序列，以及包含有目的基因的质粒。如有引物也可提供，或者由公司代合成，费用另计。客户也可提供载体，常用载体世联博研生命科学服务中心免费提供。

2. 本公司在收到客户提供的材料信息后的弟二个工作日起开始实验。

服务程序

1. 可在我公司网站内直接填写《原核表达质粒载体构建服务订单》发至我公司邮箱。

2. 可下载订单，填写完成后，用传真的形式发到我公司。

3. 可电话联系详谈有关具体要求和服务内容。

4. 签订《原核表达质粒载体构建服务合同》，预付实验总费用的50%作为实验预付款。

5. 寄送：委托单位的试验材料和试剂等均须采用te快专递形式邮寄，有低温要求的、固定要求的，按低温保存、固定防碎方法运输，以确保实验物品的安可靠。

6. 实验结束后，本公司将结果及时发给客户，同时根据客户要求处理相关材料
A.对于原核表达载体构建服务，我们提供：

原核表达载体；

构建好的重组质粒1μg；

含有重组质粒的表达保种菌；

电泳图谱，测序图谱以及酶切图以及完整的实验报告。

B. 对于原核表达载体you化服务，我们提供：

原核表达载体；

载体改造后目的基因的测序结果，质粒1ug以及含有重组质粒的甘油菌；
提供诱导前后目的蛋白的SDS-PAGE电泳图（考马斯亮蓝染色）；

完整的实验报告。

7. 客户应对所提供的材料及信息负责，如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失由客户承担。

服务项目简介

大肠杆菌(E. coli)作为表达载体，具有两个显著特征：操作简单，可在廉价的培养基中高密度生长。它的这些特征使其在科研应用中成为高效表达异源蛋白常用的原核表达系统。

尽管大肠杆菌有众多的you点，但并非每一种基因都能在其中高效表达。这归因于每种基因都有其te的结构、mRNA的稳定性和翻译效率、蛋白质折叠的难易程度、宿主细胞蛋白酶对蛋白质的降解、外源基因和E. coli在密码子偏好性上的主要差别以及蛋白质对宿主的潜在毒性等等。

服务项目

1. 质粒载体库

原核表达、酵母表达载体、哺乳动物细胞表达载体等；Clontech、Invitrogen、Stratagen、Novagen、Promega、Amersham等公司的质粒载体。

2. 载体构建及you化

（1）启动子you化

（2） 筛选标记you化

对载体上的Amp抗性、Kan抗性、Tet抗性及LacZ等地改造

（3） 其他调控元件you化

SD序列、起始密码子、GC含量、RNA的二级结构、目的蛋白的大小等，皆需考虑。

（4） 密码子you化

E.coli不常用的密码子

经过以上you化，得到的载体更适于蛋白表达与大肠杆菌内其他操作。将克隆的目的基因插入原核表达载体后，导入大肠杆菌用于表达目的蛋白。原核蛋白表达系统是迄今为止为成熟可靠的蛋白表达系统，能快速表达各种不同来源蛋白。所制备的重组蛋白可用于药物筛选、结构生物学研究、细胞生物学研究、蛋白质组学研究等的一系列领域。

FAQ（Frequently Asked Questions）

1. 原核表达载体的选择上有什么要求吗？

用什么样的原核表达载体，应注意以下几点：1.载体的多克隆位点是否有与您目的片断相同的酶切位点，且您的目的片断插入后是否会产生移码突变；2.您是否有相应的载体及其表达宿主菌；3.您准备采用什么方法纯化目的蛋白，因不同载体表达蛋白后的纯化方法并不一样。

2. 原核表达载体构建完成后，贵公司提供哪些结果？

实验结束后，本公司将结果及时发给客户，同时根据客户要求处理相关材料：原核表达载体；构建好的重组质粒1μg；含有重组质粒的表达保种菌；电泳图谱，测序图谱以及酶切图以及完整的实验报告。

3. 原核表达载体构建客户需要提供目的基因么？

客户需提供目的基因的名称及基因序列，以及包含有目的基因的质粒。